康寧Corning NK細胞活化擴增培養(yǎng)基套裝

康寧Corning NK細胞活化擴增培養(yǎng)基套裝提供了NK 細胞活化擴增的全套材料和標準操作方法，所得NK細胞擴增能力強，活性和殺傷能力高。研究者無需優(yōu)化，而且使用步驟精簡。和競爭產(chǎn)品比較了NK細胞產(chǎn)量，活力和NK 細胞體外 陽性表達比率和殺傷能力。

產(chǎn)品訂購信息

品牌          貨號        產(chǎn)品描述                         包裝

Corning    88-570-kit      NK細胞活化/擴增培養(yǎng)基套裝       1kit

康寧Corning NK細胞活化擴增培養(yǎng)基套裝組成

1. NK細胞活化培養(yǎng)基

2. NK細胞活化添加劑

3. NK細胞擴增培養(yǎng)基

4. 抗體預包被T75細胞培養(yǎng)瓶

5. 細胞培養(yǎng)袋

康寧Corning NK細胞活化擴增培養(yǎng)基套裝特色

1. 擴增能力強，在14天內(nèi)可達到100倍擴增

2. 效應細胞比例高，可達80％

3. 操作方便

自然殺傷（NK）細胞是可識別和殺死腫瘤和病毒感染的關(guān)鍵免疫細胞。 NK細胞是當今免疫-治療常用的細胞。但是NK細胞培養(yǎng)操作難度大，對培養(yǎng)條件、培養(yǎng)技術(shù)要求很高，難以獲得高純度高效能的活性細胞。過度免疫-治療所必需的離體NK細胞很難獲得。 已經(jīng)報道了幾種NK激活/擴增方法，其使用擴增介質(zhì)加各種細胞因子（例如IL-2，IL-7和IL-15）。 然而，這些需要研究人員的進一步優(yōu)化。

Corning NK細胞活化擴增培養(yǎng)基套裝NK細胞體外擴增試劑盒包含預先涂覆的T-75燒瓶，50mL NK原代培養(yǎng)基，1.8mL NK Primary補充劑和1L NK擴增培養(yǎng)基。 NK細胞體外擴增試劑盒前三個組分是專為NK細胞激活設(shè)計的，而NK擴增培養(yǎng)基用于NK細胞的擴增。 NK初級培養(yǎng)基和NK膨脹培養(yǎng)基都使用高品質(zhì)試劑和cGMP級原料制造。 NK細胞體外擴增試劑盒存在于培養(yǎng)基中的weiyi蛋白質(zhì)是血清白蛋白和重組人胰島-素的可注射水平。

Corning NK細胞活化/擴增培養(yǎng)基套裝由多個組分組成，為NK細胞培養(yǎng)提供簡便的操作方案。使用Corning NK細胞活化擴增培養(yǎng)基套裝所獲得細胞數(shù)量產(chǎn)量高，活性高，具有很高的殺傷效應。

關(guān)于使用該試劑盒激活和擴增的細胞的增殖率，免疫表型和CCK-8細胞毒性測試的信息，請參閱Corning應用筆記使用康寧NK擴增試劑盒（CLS-CG-AN-427）進行人類天然殺傷細胞擴增。

NK 細胞活化擴增培養(yǎng)基套裝操作方法

1.  抗凝血室溫離心，400 xg，10min，上層血漿轉(zhuǎn)移到新管。

2.  熱滅活自體血漿，56°C，30min。離心， 800 xg ， 20 min，去除沉淀。4°C 保存上清血漿，培養(yǎng)備用。

3.  加入等體積PBS（不含鈣鎂）替代被移除血漿保持體積不變，小心重懸血細胞。

注意：PBS預加0.1%人血清白蛋白（HSA）利于保持血細胞活性。

4.  使用淋巴細胞分離液從上面的血樣中制備PBMCs（人外周血單個核細胞）。

注意：使用新鮮采集的人血（2h內(nèi)采集）有利培養(yǎng)，不要使用超過24h的血樣。

5.  至少5倍體積的PBS（不含鈣鎂）清洗PBMCs。室溫離心500xg，10min，收集PBMCs。

6.  PBMCs稀釋到 1 x 106 cells/mL，使用NK活化培養(yǎng)基配比1.8mL NK活化添加劑和10%自體血漿。

7.  預包被T-75培養(yǎng)瓶使用前，用PBS（不含鈣鎂）清洗兩次。

8.  添加30 mL PBMC懸液到預包被T-75培養(yǎng)瓶，37°C，5% CO2培養(yǎng)。

注意：第六天之前，如果培養(yǎng)基變黃，細胞密度超過2.0 x 106 cells/mL，需要添加新鮮的NK活化培養(yǎng)基配比10%自體血漿，保持細胞密度大于 5 x 105 cells/mL。

9.  培養(yǎng)第六天，培養(yǎng)液離心，適量NK擴增培養(yǎng)基（1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿）重懸細胞，再轉(zhuǎn)移到T-225培養(yǎng)瓶或透氣細胞培養(yǎng)袋。

10.  每隔兩三天，根據(jù)細胞擴增狀態(tài)，培養(yǎng)體系中添加新鮮的NK擴增培養(yǎng)基（1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿）保持細胞密度在5 x 105到 2.0 x 106 cells/mL之間。

注意：NK擴增階段，所加新鮮培養(yǎng)基自體血漿含量推薦范圍：0.5%-1%。

11.  培養(yǎng)14天左右，收獲NK細胞。

注意：整個實驗過程中，細胞懸液吹打和培養(yǎng)容器拍打都要輕柔，以避免細胞損傷，保持細胞活性。

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