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造血干細胞培養基的適應方法

更新時間:2017-01-11 點擊次數:1657
     造血干細胞培養基的基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。 用于生物制藥和疫苗生產的細胞在體外培養時,多數呈貼壁生長或兼性貼壁生長;而當其在無血清、無蛋白培養基中生長時,由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細胞往往以懸浮形式生長。
    造血干細胞是指尚未發育成熟的細胞,是所有造血細胞和免疫細胞的起源。因此是多功能干細胞,醫學上稱其為“萬用細胞”,也是人體的始祖細胞。干細胞是具有自我復制和多向分化潛能的原始細胞,是機體的起源細胞,是形成人體各種組織器官的祖宗細胞。它有兩個重要特征:其一,高度的自我更新或自我復制能力;其二,可分化成所有類型的血細胞。造血干細胞采用不對稱的分裂方式:由一個細胞分裂為兩個細胞。其中一個細胞仍然保持干細胞的一切生物特性,從而保持身體內干細胞數量相對穩定,這就是干細胞自我更新。而另一個則進一步增殖分化為各類血細胞、前體細胞和成熟血細胞,釋放到外周血中,執行各自任務,直至衰老死亡,這一過程是不停地進行著的。
    造血干細胞培養基的適應方法:
    1.直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中。
    一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。對于直接適應,接種細胞密度應該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時,傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時,細胞*適應了無血清培養基。每隔3~5天,當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
    2.連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中,與直接適應相比較,連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。
    (1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75%有血清培養基:25%SFM 混合培養基中,傳代培養。
    (2)當細胞密度>5×10細胞/ml時,以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,在有血清培養基:SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。
    (3)以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,25%有血清培養基和75% SFM中傳代培養。
    (4)當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養基中傳代培養。
    (5)每隔3到5天,當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。

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