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細胞培養過程中的注意事項及試劑配制

更新時間:2015-12-23 點擊次數:1400
一.常用設備 準備室的設備: 單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜(放置未消毒物品)、儲品規(放置消毒過的物品)、包裝臺。 配液室的設備: 扭力天平和電子天平(稱量藥品)、PH計(測量培養用液PH值)、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液)。 培養室的設備: 液氮罐、儲品柜(存放雜物)、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統、低溫冰箱(-80℃)、空調、二氧化碳缸瓶、邊臺(書寫實驗記錄)。必須放在無菌間的設備:離心機(收集細胞)、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱(孵育培養物)、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱(放置serum和培養用液)。

二.無菌操作 無菌室的滅菌:
1.定期打掃無菌室:每周打掃一次,先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等,然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅或者0.5%過氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱(培養箱)滅菌:先用3‰新潔爾滅擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%過氧乙酸,再用紫外燈照射
3.實驗前滅菌:打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統各20-30分鐘
4.實驗后滅菌:用75%酒精(3‰新潔爾滅)擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。 實驗人員的無菌準備: 1.肥皂洗手。 2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋 3.用75%酒精棉球擦凈雙手。 無菌操作的演示: 1.凡是帶入超凈工作臺內的酒精、PBS、培養基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面 2.靠近酒精燈火焰操作。 3.器皿使用前必須過火滅菌 4.繼續使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處,使用時仍要過火。
5.各種操作要靠近酒精燈,動作要輕、準確,不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。
6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管,防止交叉污染。

三.器械的清洗和消毒 玻璃器械洗消:
(1)新的玻璃器皿的洗消:
1.自來水刷洗,除去灰塵。
2.烘干、泡鹽酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀鹽酸中12小時以除去臟物、鉛、砷等物。
 3.刷洗、烘干:12小時后立即用自來水沖洗,再用洗滌劑刷洗,自來水沖干凈后用烤箱烘干。
4.泡酸、清洗:用清潔液(重鉻酸鉀120g:濃硫酸200ml:蒸餾水1000ml)浸泡12小時,然后從酸缸內撈出器皿用自來水沖洗15次,zui后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。
5.烘干、包裝:洗干凈后先烘干,然后用牛皮紙(油光紙)包裝。
6.高壓消毒:包裝好的器皿裝入高壓鍋內蓋好蓋子,打開開關和安全閥,當蒸氣成直線上升時,關閉安全閥,當指針指向15磅時,維持20-30分鐘。
7.高壓消毒后烘干
(2)舊的玻璃器皿的洗消:
1.刷洗、烘干:使用過的玻璃器皿可直接泡入來蘇爾液或洗滌劑溶液中,泡過來蘇爾溶液(洗滌劑)的器皿要用清水刷洗干凈,然后烘干。
2.泡酸、清洗:烘干后泡入清潔液(酸液),12小時后從酸缸內撈出器皿立即用自來水沖洗(避免蛋白質干涸后粘附于玻璃上難以清洗),再用蒸餾水沖洗3次。
3.烘干、包裝:洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙(油光紙)等包裝,以便于消毒儲存及防止灰塵和再次被污染。
4.高壓消毒:包裝好的器皿裝入高壓鍋內,蓋好蓋子,打開開關和安全閥,隨著溫度的上升安全閥冒出蒸氣,當蒸氣成直線冒出3-5分鐘后,關閉安全閥,氣壓表指數隨之上升,當指針指向15磅時,調節電開關維持20-30分鐘即可。(玻璃培養瓶消毒前可將膠帽輕輕蓋上)
5.烘干備用:因為高壓消毒后器皿會被蒸氣打濕,所以要放入烤箱內烘干備用。 金屬器械洗消: 金屬器皿不能泡酸,洗消時可先用洗滌劑刷洗,后用自來水沖干凈,然后用75%酒精擦拭,再用自來水,然后用蒸餾水沖洗,再烘干或空氣中晾干。放入鋁制盒內包裝好在高壓鍋內15磅高壓(30分鐘)消毒,再烘干備用。 

注意事項: 1.嚴格執行高壓鍋的操作規程:高壓消毒時,先檢查鍋內是否有蒸餾水,以防高壓時燒干,水不能過多因為其將使空氣流暢受阻,會降低高壓消毒效果。檢查安全閥是否通暢,以防高壓時爆炸。 2.安裝濾膜時注意光面朝上:注意濾膜光滑一面是正面,要朝上,否則起不到過濾的作用。 3.注意人體的防護和器皿的*浸泡:A.泡酸時要戴耐酸手套,防止酸液濺起傷害人體。B.從酸缸內撈取器皿時防止酸液濺到地面,會腐蝕地面。C.器皿浸入酸液中要*,不能留有氣泡,以防止泡酸不*。 四.細胞培養用液的配制與消毒

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