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造血干細(xì)胞培養(yǎng)基配制

更新時(shí)間:2015-06-08 點(diǎn)擊次數(shù):1199
    人造血干細(xì)胞作為成體干細(xì)胞的重要組成,尤其在胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為造血干細(xì)胞的機(jī)理、CD34和CD45等表面標(biāo)志分子成功篩選、培養(yǎng)條件的優(yōu)化探索中取得了突破性進(jìn)展,這為治療惡性血液疾病、根本緩解血細(xì)胞來(lái)源緊張等臨床應(yīng)用提供了可能。本文就人類(lèi)胚胎干細(xì)胞向造血干細(xì)胞方向分化的研究進(jìn)展作如下綜述,以期為致力于該研究領(lǐng)域工作的科研人員提供一些有益的參考。
    人體大部分骨頭的中央部門(mén)有骨腔,骨腔內(nèi)所含的物質(zhì)即骨髓.骨髓中有一種能起著造血功能的細(xì)胞就叫造血干細(xì)胞.人血中的紅細(xì)胞,血小板,淋巴細(xì)胞,粒細(xì)胞等,都是由它經(jīng)過(guò)多次分化發(fā)育而成的.
    造血干細(xì)胞( hematopoietic stem cell,HSC) 具有高度的自我更新和多向分化潛能,是組織特異性干細(xì)胞研究中zui為活躍和成熟的研究方向,也是組織特異性干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化研究的發(fā)源地和核心,已經(jīng)成為目前研究zui為深入的成體干細(xì)胞,在世界范圍內(nèi)得到了廣泛應(yīng)用。
    造血干細(xì)胞培養(yǎng)基配制
    一、配制用水
    培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn),水的電阻應(yīng)為200萬(wàn)歐姆,一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。
    二、培養(yǎng)基
    培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2-7.4,若pH值超過(guò)7.6或遠(yuǎn)低于6.8,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。
    三、血清
    培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類(lèi)、時(shí)間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無(wú)血清培養(yǎng)基。
    四、抗菌素
    為防止培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的污染,可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)抗菌素,一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/毫升,鏈霉素100微克/毫升。
    五、植物血凝素(PHA)
    非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細(xì)胞,但在離體培養(yǎng)過(guò)程中,在PHA的作用下,可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂。
    經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時(shí)和68-72小時(shí)。
    PHA有粘多糖,蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA激活的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細(xì)胞均被激活為止,但PHA濃度過(guò)高會(huì)引起凝集,一般采用4%濃度為好。

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