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淺談Lonza支原體檢測試劑盒的檢測原理
點擊次數:1466 更新時間:2014-03-29
支原體檢測試劑盒:支原體又稱霉形體,沒有細胞壁的原核生物,為目前發現的zui小的zui簡單的原核生物。支原體細胞中*可見的細胞器是核糖體(支原體是原核細胞,原核細胞的細胞器只有核糖體)。它對許多抗生素具有抗性,如類胸膜肺炎微生物。
支原體檢測試劑盒常規檢測才能有效避免細胞支原體污染
1.常規性的進行支原體檢測是保證細胞培養中不受到支原體污染影響的*途徑。
2.傳統的支原體檢測方法需要在特殊的選擇性培養基作用下對樣品進行培養,時間往往達數周,費時,費力并且無法獲得足夠的靈敏度和特異性。
美國Lonza MycoAlert Mycoplasma Detection Kit支原體檢測試劑盒是利用支原體酶的這一特定活性,進行選擇性的生物化學檢測。這些酶的存在提供了一種快速的篩選操作,能靈敏地檢測出樣本中的支原體污染。這些存活的支原體被溶解,然后釋放出來的酶與支原體檢測試劑盒中提供的底物發生催化反應,將ADP轉化成ATP。通過測量樣品中添加底物前后ATP的含量,可以得到一個比率,該比率指示支原體是否存在。如果這些酶不存在,第二次讀數相對于*次讀數就沒有增加;如果酶與底物進行特異性反應,就會導致ATP含量上升。ATP含量的上升通過生物發光化學反應可以檢測到,其公式如下:
Luciferase
ATP + Luciferin + O2 ——————> Oxyluciferin + AMP
Mg 2+ + PPi + CO2 + LIGHT
這個反應的發生是在室溫(18°C~22°C)進行的,也是熒光素酶反應的*溫度。
在支原體檢測試劑盒的檢測原理中,zui后通過分光光度計讀數,由于發出光的強度與ATP的濃度成線性關系,因此可檢測支原體的污染問題。
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