1.什么是化學成分明確的無血清培養基？

答：化學成分明確的培養基只含有分子量和濃度已知的組分。

2.使用無血清培養基或組分有什么優點？

答：批間一致；化學成分明確；與含血清培養基相比，蛋白產量高、細胞死亡率低、細胞活性高；培養基性能穩定，后續分離純化容易，因此無需預先篩選血清批次，簡化了生產規程。

3.我能用DMEM替代DMEM/F12么？

答：DMEM/F12培養基是DMEM培養基和F12培養基的1:1混合物，因此DMEM/F12的營養好于DMEM。

4.如何提高有血清培養的細胞向無血清培養條件轉化的成活率？

答：一般而言，將細胞從血清培養條件過渡到無血清培養需要一個過渡，可以先嘗試梯度減少原培養基，加入無血清培養基，直到zui后*替換為無血清培養基即可。不要突然全部換掉原培養基，細胞可能會由于環境的突然改變不適應而減緩增殖或出現大量分化。

5.如何判斷細胞合適的傳代時間？

答：一般來說，在電鏡下觀察細胞長滿孔板（或者培養板/瓶）的85-90%為*傳代時間點。但具體的傳代時間也因具體實驗的要求、所需細胞的數量而有所調整。但如果細胞長不滿50%就傳代的話，也會影響細胞自身的增殖和生長（細胞與細胞之間也存在著“扎堆抱團”效應）。

6.培養MSCs是否需要提前鋪板？

答：針對不同的培養基要求不同，有一些培養板需要提前鋪板包被才可以使用有的不需要對使用的培養板進行鋪板包被處理，MSCs可以直接進行培養或傳代等，大大節省了鋪板膠的成本和人力成本。

7.日常培養MSCs的過程中，是否需要每天換液？

答：細胞培養換液時間應該根據細胞生長的狀態和實驗要求一同確定。一般2-3d應該換一次生長液。傳代操作的第二天換液，及時給新傳代的細胞補充營養成分，更有利于細胞的生長。

8.如何判斷培養的細胞是否污染？

答：細胞污染的話，從表象來看，培養基會發黃渾濁，如果還可以用肉眼看到一層細沙狀的污染物沉積在培養液底部，則是典型的細菌污染，在電鏡下還可以看到黑點狀的細菌在不斷晃動；如果肉眼看見的是白色的絲狀或者類似絮狀的物質，在電鏡下也可觀察到類似現象，則可判定為真菌污染。但具體是哪一類的細菌或者真菌污染，還需要更進一步的分析研究。

9.細胞培養基里添加抗生素是不是必須的？

答：抗生素的作用主要是防止細胞培養液中添加成分或者細胞培養操作過程中帶來的外界污染，加入抗生素可以有效降低細胞污染的幾率，但視培養條件和培養環境的差異而定，抗生素也不是必須添加的。

10.細胞復蘇的原則：快速融化。必須將凍存在-80°C液氮中的細胞快速融化至37°C，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

11.細胞倍增數（PD）和“傳代”之間的區別是什么？

答：細胞倍增數（PD）是在體外培養過程中細胞總數的2倍增加。在某個特定的時間點進行細胞倍增數的計算能夠給出一個準確的細胞年齡。相比之下，傳代僅僅是指子代培養過程，即從培養容器分離細胞（使用胰蛋白酶/EDTA或accutase），然后以較低的密度接種，以便作進一步的細胞生長。傳代通常不考慮可應用的不同的分裂比率。不同的分裂比率產生一個*的傳代數量，但細胞倍增數是變化的。因此，傳代只是對實際培養年齡的一個粗略估計。

12.培養正常人體細胞可以添加抗生素么？

答：為了使細胞實現*的生長，我們建議不要使用抗生素。在添加抗生素的情況下，大多數原代的或者正常的人體細胞的生長活性都會降低。在某些情況下，當不能保證100%的無菌環境時，為了防止潛在的微生物感染，建議在培養基中添加抗生素。

13.凍存的細胞和增殖中的細胞之間的區別是什么？

答：一般運送細胞需要用干冰進行保存，運輸抵達后，必須轉移到液氮中保存，或者解凍后直接接種到合適的培養基中，并使用合適的組織培養瓶培養。

14.添加補充劑之后培養基可以使用多久？

答：一旦已經向基礎培養基中加入補充劑，則在4°C的保質期為6-8周。盡量避免將培養基重復加熱至37°C，這將降低生長因子的活性和L-谷氨酰胺的濃度。