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血細(xì)胞計數(shù)板的實驗原理及注意事項

更新時間:2022-02-15 點擊次數(shù):7031
實驗原理  
在細(xì)胞培養(yǎng)工作中,常需要了解細(xì)胞生活狀態(tài)和鑒別細(xì)胞是否存活,確定細(xì)胞接種濃度和數(shù)量以及了解細(xì)胞活力和增殖狀況,如胰酶消化制備的細(xì)胞懸液中細(xì)胞存活率確定,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后的活力檢測等。  
存活測試的原理為染料排除實驗,利用染料會滲入死細(xì)胞中而呈色,因活細(xì)胞細(xì)胞膜完整,染料無法滲入而不會呈色。一般使用臺盼藍(lán)染料,如果細(xì)胞不易吸收臺盼藍(lán),則用赤蘚紅B。計算細(xì)胞活率:活細(xì)胞數(shù)/(活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù))×100%。計數(shù)應(yīng)在臺盼藍(lán)染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成,隨時間延長,部分活細(xì)胞也開始攝取染料;因為臺盼藍(lán)與蛋白質(zhì)有很強的親和力,用不含血清的稀釋液,可以使染色計數(shù)更為準(zhǔn)確。  
注意事項  
滴細(xì)胞懸液時要干凈利落,加量要適當(dāng),過多易使蓋片漂移,或淹過蓋片也會失敗,應(yīng)重做;過少易出現(xiàn)氣泡;不理想時,應(yīng)重做。  
鏡下計數(shù)時,若方格中細(xì)胞分布明顯不均勻,說明細(xì)胞懸液混合不均勻,需重新將細(xì)胞懸液進(jìn)行混合,再重新計數(shù)。  
計數(shù)時,對于位于邊線或交界處的細(xì)胞/細(xì)胞團,遵循“計上不計下,計左不計右”的規(guī)則。  
一個細(xì)胞團計做一個細(xì)胞。  
計數(shù)板計數(shù)時,最適濃度為5~10×105細(xì)胞/ml,此范圍外計數(shù)誤差偏大。高濃度細(xì)胞懸液,可取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計數(shù)。如果細(xì)胞數(shù)目很少則要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中。

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